黃芪、水蛭、地龍不同配伍治療缺血性中風實驗研究

黃芪、水蛭、地龍不同配伍治療缺血性中風實驗研究
翟曉翔
摘要:提出氣虛血瘀絡阻為缺血性中風的基本病機,而益氣活血通絡則為基本治法。通過黃芪水蛭地龍、黃芪水蛭、黃芪地龍、水蛭地龍四個配伍組比較,以觀察其對急性腦缺血大鼠血漿一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)、血小板聚集性及大鼠在體血栓形成時間的影響。結果表明,黃芪水蛭地龍配伍組在以上諸方面的作用明顯優於其他組。
關鍵詞:黃芪;水蛭;地龍;配伍;缺血性中風;一氧化氮;丙二醛;實驗研究



晚近時期眾多復方與單味藥臨床及實驗研究表明,氣虛血瘀絡阻乃缺血性中風的基本病機,而益氣活血通絡是基本治法。基於此,筆者從中篩選出當前治療缺血性中風運用較多、療效可靠的黃芪、水蛭、地龍進行不同配伍,通過有關藥理實驗研究,以探討和尋求防治缺血性中風的高效、速效、低毒藥對,為臨床應用提供依據。
1分組情況
將黃芪、水蛭、地龍三味藥量按9︰1︰2,25組成黃芪+水蛭+地龍(9︰1︰2.25,A)、黃芪+水蛭(9︰1,B)、黃芪+地龍(9︰2,25C)、水蛭+地龍(1︰2.25,D)四種配伍形式。動物分設五組,相應為A、B、C、D組及生理鹽水組。
2材料
2,1動物Wistar大鼠由山東省實驗動物中心提供,合格證編號:魯動質字960101。
2.2藥物黃芪(AstragalusmongholicusBge,)、水蛭(HiyudonipponicdWhitman)、地龍(Pheretimaaspergillum)(E,Perrier)購自濟南建聯中藥店,經本校中藥鑒定教研室鑒定,符合《中華人民共和國藥典》1995年版標準。
在總藥量相等的前提下,黃芪、水蛭、地龍按照既定的四種配伍形式和劑量比例分四組稱重。加10倍水將藥物浸泡1h,煮沸後再煎1.5h,紗布過濾,二煎加水8倍,煮沸後再煎1h,紗布過濾,兩煎相合,水浴濃縮至每毫升含生藥1g(1.0g/ml)。分別制得A、B、C、D四種藥劑,置於4℃冰箱保存備用。
2.3儀器1BT87-3體內血栓形成測定儀,包頭醫學院電器維修科技開發部。2LBY-NJ2全自動四通道血小板凝聚儀,北京普利生儀器中心。3721M-分光光度計,上海第三分析儀器中心。
2.4試劑1NO測定試劑盒,南京建成生物工程研究所。2MDA測定試劑盒,南京建成生物工程研究所。
2.5器械大鼠手術台及手術器械、硅化離心管、微量移液器(10μl、20μl)。
3實驗方法與結果
3.1對大鼠在體血栓形成時間的影響1動物分組及處理;將體重為200±30g的Wistar大鼠40只,雌雄各半,隨機分為5組,每天分別灌胃各組配伍煎液:A組1.8ml/只,B組1.4ml/只,C組1.6ml/只,D組0.5ml/只,生理鹽水組灌胃生理鹽水,日1次,連續給藥15d。2方法,根據頸動脈溫度測定法[1]進行實驗。測得數據按F檢驗進行統計學處理。3實驗結果:見表1。
A、B、C、d四組均有顯著對抗在體血栓形成的作用,且A、B、C、D四組相比,以A組作用最顯著。
表1對大鼠在體血栓形成的影響(x±s)
與生理鹽水組比P<0.05,P<0.01;與A組比P<0.05,P<0.01
3.2對實驗性急性腦缺血大鼠血小板聚集性的影響動物分組及處理同實驗1。第13天灌胃1h後,按腦血管自身血液塊栓塞法[2]進行造模。4h後腹主動脈取血2ml,放入枸櫞酸鈉抗凝試管中(血與抗凝劑比例9︰1)。800r/min離心10min,得富血小板血漿(PRP),3000r/min離心15min,得貧血小板血漿(PPP),以ADP為誘導劑,37℃環境中按「全自動血小板凝集儀說明書」測定方法測定血小板聚集率。實驗結果見表2。
表2對急性腦缺血大鼠血小板聚集性的影響(x±s)
與生理鹽水組比P<0.05,P<0.01;與A組比P<0.05,P<0.01
從表2看出,生理鹽水組血小板聚集率明顯高於用藥組。用藥組皆能降低血小板聚集率,顯著延長最大聚集率發生時間。從1min、3min、5min血小板聚集率來看,用藥組血小板聚集後具有解聚快的特點,尤以A組作用最為顯著。
3.3對實驗性急性腦缺血大鼠血漿NO、MDA的影響動物分組、處理及急性腦缺血大鼠造模同實驗2。4h後,腹主動脈抽血5ml,放入肝素抗凝試管中,然後800r/min離心10min,取上清液,-80℃冰箱下保存待測。NO含量測定按NO測定試劑盒說明書進行。結果見表3。
表3對急性腦缺血大鼠血漿NO的影響(x±s)
與生理鹽水組比P<0.01;與A組比P<0.05,P<0.01
用藥組與生理鹽水組相比皆有顯著的升高血漿NO含量的作用。用藥組之間相比,以A組作用最為顯著。MDA含量測定按MDA測定試劑盒說明書進行。結果見表4。
表4對急性腦缺血大鼠血漿MDA的影響(x±s)
與生理鹽水組比P<0.01;與A組比P<0.05,P<0.01
用藥組除C組外,皆能顯著降低血漿MDA水平(P<0.01).用藥組4組相比,以A組作用最顯著(P<0.05或0.01)。
4討論
4.1關於劑量比例的確定補陽還五湯原方黃芪為4兩、地龍為1錢,但現代臨床治療缺血性中風的復方中黃芪、地龍的比例多在1.5-10︰1之間,全國中醫內科學會中風病學組於1988年10月制定的中風病中醫診療規範,在中風病急症治療與搶救實施方案裡的中經絡之氣虛血瘀證處方中芪:龍為3︰10,結合古今用量和本實驗具體情況,黃芪與地龍的比例定為4︰1。
水蛭的臨床用量,張仲景抵當湯用30枚,大黃廑蟲丸用至100枚。張錫純用量為每次1.5g研末開水沖服,日2次。《中畢人民共和國藥典》1990年版規定湯劑用量每次為1.5-3g,研末吞服在0.5g以下。而現代臨床報道,水蛭劑量可根據病情需要在1.5-3g之間選擇應用。目前,在治療缺血性中風的復方中,黃芪與水蛭的比例多在5-20︰1之間。結合古今臨床用量、藥典及本實驗具體情況,黃芪與水蛭的比例定為9︰1。
故基本配伍的比例黃芪︰水蛭︰地龍為9︰1︰2.25。
4.2關於動物病理模型的選擇採用腦血管自身血液塊栓塞法。由於血塊為自身心臟血液凝固碎片,故比其他異物更接近於人的腦栓塞,且模型的重複性好,實驗過程較易操作,具有很高的實用價值,為探討黃芪、水蛭、地龍配伍治療缺血性中風的藥理作用提供了較接近於臨床的病理模型。
4.3對大鼠在體血栓形成時間的影響血栓形成在缺血性中風中占重要地位。由於血栓形成,血流受阻,引起局部血管支配的腦組織缺血缺氧,甚至壞死,而出現中風的各種症狀。血栓形成的因素是多方面的,如血管內皮受損,血小板粘附、聚集和釋放反應,血液凝血活性增高,血液粘度增加,血流緩慢等。
本實驗1採取直流電連續刺激大鼠頸總動脈,引起血管內膜損傷,激活血小板和凝血系統,同時損傷血管內皮細胞,使PGl2的合成和釋放減少,致使頸動脈血管內逐漸形成混合血栓。本實驗結果表明;A、B、C、D四組均有顯著對抗在體血栓形成的作用(P<0.05或0.01)且A組作用最強(P<0.05或0.01)。
4.4對實驗性急性腦缺血大鼠血小板聚集性的影響缺血性中風發生後,患者的血液流變學有廣泛而明顯的異常,血液呈濃、粘、凝、聚狀態。其血小板聚集的功能是亢進的,因為:一是發生腦血栓後,TXA2合成增多,可促進血小板的聚集;PGI2合成減少,抗血小板粘附、聚集能力下降,二是缺血性中風發生後,局部小血管內膜因缺血而受損,導致內皮下的結締組織暴露,血小板的釋放反應被膠原蛋白啟動,其粘附性和聚集性增加[3]。所以抗血小板聚集乃治療缺血性中風的一個重要措施。
本實驗結果顯示:用藥組皆能降低血小板最大聚集率,顯著延長最大聚集率發生時間(P<0.01),從1min、3min、5min血小板聚集率來看,用藥組血小板聚集後具有解聚快的特點,且以A組作用最為顯著(P<0.05或0.01)。
4.5對實驗性急性腦缺血大鼠血漿一氧化氮(NO)的影響NO是一種新發現的介質,它既是一種信使分子又是一種毒性分子。它在缺血性中風的發生中起著重要而複雜的作用。NO是左旋精氨酸(Larg)在NO合成酶(NOS)作用下生成的,在神經系統內類似神經遞質而具有信息傳遞功能,其在腦循環中作用的主要靶器官是血管平滑肌。NO的基礎釋放可保護腦血管內皮,調節腦血流,改善微循環及抑制血小板的聚集和粘附,抑制腦循環自發性血管收縮及腦血管對收縮因子的反應。這種條件下產生的NO主要受CNOS調控,影響因素為血流搏動、機械性牽拉和剪切力等:NO還可以不依較cGMP降低細胞內游離Ca2+,從而防止細胞內Ca2+過高。N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)過度活化可介導細胞損傷,而NO可阻斷NMDA受體,而對缺血區邊緣腦組織起直接保護作用[4,5]。但NO又可形成自由基或通過其他途徑產生神經毒而促使缺血邊緣腦組織向梗死發展,所以,NO在缺血性中風裡的作用是相當複雜的,它既與所處缺血性中風發生的不同階段有關,又與NOS的類型、NO的生成時間和NO氧化還原狀態有關。經研究證明,缺血性中風時NO的有益作用,僅見於初發的幾小時,隨著時間的延長,毒性作用將趨明顯。
用藥組血漿NO含量在實驗性急性腦缺血初期有明顯升高,其原因可能是:1腦缺血時縮血管物質如ET、TXA2等明顯增高,機體只得通過代償性增加NO含量以加強擴血管作用,改善局部腦血流。而用藥後使這種代償作用增強。2用藥後通過某一途徑激活了NOS,使NO大量生成,從而對抗缺血性中風的腦血流量(cerebralbloodflow,CBF)減少,血小板粘附、聚集功能亢進等一系列病理現象。
通過實驗結果觀察,用藥組與生理鹽水組相比能非常顯著升高血漿NO的水平(P<0.01),保護大腦免受缺血性損害,用藥組之間相比,以A組作用最為顯著(P<0.05或0.01)。
4.6對實驗性急性腦缺血大鼠血漿丙:二醛(MDA)的影響MDA為氧與不飽和脂肪酸反應形成過氧化脂質的終產物,腦缺血時,自由基急劇增加,其引發的脂質過氧化反應增強,細胞膜的完整性遭到破壞,一些酶的空間構型被改變,線粒體膜上的呼吸鏈被損傷,最終造成細胞結構改變,導致組織死亡[5]。
MDA對細胞的損害作用是引起生物膜上的不飽和脂肪酸脂質過氧化反應,形成大量的過氧化脂質,而其終產物是MDA,故測定MDA含量可反映組織中自由基的含量和脂質過氧化程度,以間接反應腦組織的受損傷程度。
本實驗結果表明,用藥組與生理鹽水組相比,除C組外,都有非常顯著的差異(P<0.01),即皆能顯著降低血漿MDA水平,具有抗過氧化反應的作用,通過對抗自由基對腦組織的損害作用而起到保護腦組織的功效,用藥組相比,以A組作用最顯著(P<0.05或0.01)。
綜上所述,黃芪、水蛭、地龍配伍具有明顯的抗體內血栓形成作用,在實驗性腦缺血急性期,能明顯降低血小板的聚集性,從一個側面來改善血液的濃、粘、凝、聚狀態:能增強實驗大鼠代償性升高血漿NO含量的能力及明顯降低血漿中過氧化脂質的含量,從而保護腦組織因缺血而造成的一系列病理損害。通過與黃芪、水蛭配伍(B組),黃芪、地龍配伍(C組),水蛭、地龍配伍(D組)比較,綜合各項指標,以黃芪、水蛭、地龍配伍(A組)最好。這符合缺血性中風的基本病機是氣虛血瘀絡阻的論點。故治療缺血性中風時,本文認為應以益氣活血通絡為基本治法,結合臨床具體情況辨證施治而輔以他法。
由於本研究受多方面條件的限制,黃芪、水蛭、地龍配伍其他相關方面的藥理作用、劑量對藥理作用的影響以及類似功用的中藥配伍是否具有同樣的藥理作用等,有待進一步研究。
作者簡介:瞿曉翔(1965-),男,醫學碩土,現工作於江蘇省徐州市中醫院,注重中藥配伍研究。